الــزعــيــم
12-09-2007, 03:16 PM
إنتاج أشتال حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية ViruseFree Plant Production
الخلاصـة
تم إنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمـــراض الفيروسية لعدة أصناف من الحمضيات وذلك في مختبر زراعة الأنسجة Tissue culture ومن ضمنها طريقة Shoot tip grafting وقد تم التأكد من خلو الشتلات الناتجة من فيروس التدهور السريع Tristeza وذلك عن طريق استخدام طريق الإليزا ELISA.
المقـدمة
تصاب أشجار الحمضيات بعدة أمراض فيروسية ومن أخطرها فيروس التدهور السريع (التراستيزا) الذي يفتك بآلاف الأشجار في عدة مناطق في العالم وخاصة الأشجار المطعومة على أصل نارنج. وهذه الأمراض الفيروسية تفتك بالأشجار وتؤدي إلى ضعف عام وموت مفاجئ أحياناً وبالتالي إلى تدهور الاقتصاد الزراعي. ولوحظ انتشار فيروس التدهور السريع في عدة مناطق داخل دولة الإمارات العربية المتحدة وعلى عدة أصناف من الحمضيات حيث تراوحت نسبة الإصابة من 1 - 16% مما أدى إلى تدهور إنتاج الحمضيات واقتلاع وموت العديد من الأشجار.
ولعل من الأسباب التي أدت إلى زيادة انتشار هذا الفيروس سهولة انتقاله حشرياً بواسطة حشرات المن Myzus citrcidous ونقله ميكانيكياً عن طريق مقصات التقليم والأدوات الزراعية ونقله أيضاً عن طريق التطعيم وذلك بتطعيم الأشتال بطعوم من أمهات مصابة بالفيروس أصلاً. إلى جانب ذلك انتشرت ظاهرة عدم التوافق بين الأصل والطعم Incompatability والتي أدت إلى موت كثير من الأشجار بعد مضي 7 - 10 سنوات من عمرها.
وتفادياً لذلك فقد استخدمت طريقة زراعة الأنسجة Tissue culture وذلك لإنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية وخاصة التراستيزا وبكميات كبيرة وكذلك لتفادي ظاهرة عدم التوافق بين الأصل والطعم وذلك للحفاظ على الثروة الزراعية لأشجار الحمضيات داخل الدولة مع مراعاة الحفاظ على هذه الأشتال من الإصابات ومراعاة رشها دورياً ضد حشرة المن الناقلة للفيروس.
خطوات العمل
تعتمد تقنية إنتاج أشتال حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية على ثلاث مراحل أساسية وهي:
المرحلة الأولى
إنبات الأصل:
استخدمت بذور النارنج وتم زراعتها بعد تقشيرها وتعقيمها بمحلول هيدروكسيد الصوديوم في وسط غذائي صلب (بيئة مغذية) تحتوي على الأملاح المعدنية والفيتامينات بالإضافة إلى الهرمونات التي تساعد على سرعة الإنبات والاستطالة. تم تحضين الأنابيب المحتوية على الوسط الغذائي وبذور النارنج بحاضنة ذات درجات حرارة ورطوبة منتظمة وبدون إضاءة لمدة (15-20) يوم حتى تم الحصول على نباتات مستقيمة طولها حوالي 10 سم (أصل).
المرحلة الثانية
التطعيم القمي الدقيق Micrograftiong: تم الحصول على براعم قمية لأصناف مختلفة من الحمضيات من أمهات خالية من الأمــراض الفيروسية وخاصة التراستيزا بعد فحصها سيرولوجياً بطريقة الأليزا وأجريت عمليات التعقيم للتأكد من خلوها من الملوثات الخارجية وفي كابينة العزل (Laminar flow) تم استئصال المرسيتم القمي مجهرياً (الطعم) وأجريت عملية تطعيم بين الأصل بعد إزالة ثلثي الجذر وثلث الساق وبين الطعم وذلك على شكل حرف T. وبعد تثبيت المرسيتم القمي (الطعم) داخل الأصل بشكل حرف T مقلوبة تم زراعة النموذج في أنابيب اختبار تحتوي على أوساط مغذية خاصة وأجري تحضين للأنابيب داخل غرفة النمو على درجة حرارة 28 - 32 ْم مع توفر إضاءة لمدة 16 ساعة ضوئية يومياً وذلك لمدة 30 يوم تقريباً لحين التئام الأصل والطعم والحصول على نبات داخل الأنبوب.
المرحلة الثالثة
التطعيم القمي: Shoot Tip Grafting: أجريت هذه الخطوة داخل البيوت المحمية المنزرعة بأشتال لعدة أصناف من الحمضيات والتي تم استخدامها كأصول للتطعيم. نقلت النباتات النامية في الأنابيب والمتحصل عليها من الخطوة السابقة وتم فصل البراعم النامية وأجريت عملية تطعيم لهذه البراعم على الأصول المختلفة لشتلات الحمضيات مع مراعاة تطابق الأصل مع الطعم لتلافي ظاهرة عدم التطابق. أجريت عملية التطعيم في مناطق مختلفة على الأصل وذلك لضمان نجاح العملية وتم تكييس الشتلات المطعومة بأكياس من البلاستيك بهدف رفع درجة الرطوبة ومنع جفاف منطقة التطعيم وبعد التأكد من نجاح عملية التطعيم تم إزالة الكيس البلاستيكي للسماح للنباتات الناتجة باستمرارية النمو حتى حجم معين وتم نقلها للحقول المستديمة مع مراعاتها من حيث التسميد والري ومنع الإصابة الفيروسية الجديدة. وبذلك تم الحصول على شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية مع مراعاة توافق الأصل والطعم.
التوصـــــــات
نظراً لزيادة الرقعة الزراعية وزراعة العديد من أصناف الحمضيات المحلية والمستوردة ولزيادة انتشار الأمراض الفيروسية التي تفتك بأشجار الحمضيات فتعتبر تقنيات إنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية من التقنيات الحديثة والسريعة والتي تؤدي إلى إنتاج أعداد هائلة من الشتلات التي يراعى فيها الإنتاجية المرتفعة والتأقلم تحت الظروف المناخية للدولة وكذلك يراعى فيها التوافق بين الأصل والطعم فلذلك نوصي بإتباع طريقة زراعة الأنسجةTissue Culture على نطاق واسع لإنتاج شتلات خالية من الأمراض الفيروسية مع مراعاة عدم تجدد الإصابة لهذه الشتلات وذلك بالحفاظ عليها بعيداً عن مصادر العدوى.
الخلاصـة
تم إنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمـــراض الفيروسية لعدة أصناف من الحمضيات وذلك في مختبر زراعة الأنسجة Tissue culture ومن ضمنها طريقة Shoot tip grafting وقد تم التأكد من خلو الشتلات الناتجة من فيروس التدهور السريع Tristeza وذلك عن طريق استخدام طريق الإليزا ELISA.
المقـدمة
تصاب أشجار الحمضيات بعدة أمراض فيروسية ومن أخطرها فيروس التدهور السريع (التراستيزا) الذي يفتك بآلاف الأشجار في عدة مناطق في العالم وخاصة الأشجار المطعومة على أصل نارنج. وهذه الأمراض الفيروسية تفتك بالأشجار وتؤدي إلى ضعف عام وموت مفاجئ أحياناً وبالتالي إلى تدهور الاقتصاد الزراعي. ولوحظ انتشار فيروس التدهور السريع في عدة مناطق داخل دولة الإمارات العربية المتحدة وعلى عدة أصناف من الحمضيات حيث تراوحت نسبة الإصابة من 1 - 16% مما أدى إلى تدهور إنتاج الحمضيات واقتلاع وموت العديد من الأشجار.
ولعل من الأسباب التي أدت إلى زيادة انتشار هذا الفيروس سهولة انتقاله حشرياً بواسطة حشرات المن Myzus citrcidous ونقله ميكانيكياً عن طريق مقصات التقليم والأدوات الزراعية ونقله أيضاً عن طريق التطعيم وذلك بتطعيم الأشتال بطعوم من أمهات مصابة بالفيروس أصلاً. إلى جانب ذلك انتشرت ظاهرة عدم التوافق بين الأصل والطعم Incompatability والتي أدت إلى موت كثير من الأشجار بعد مضي 7 - 10 سنوات من عمرها.
وتفادياً لذلك فقد استخدمت طريقة زراعة الأنسجة Tissue culture وذلك لإنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية وخاصة التراستيزا وبكميات كبيرة وكذلك لتفادي ظاهرة عدم التوافق بين الأصل والطعم وذلك للحفاظ على الثروة الزراعية لأشجار الحمضيات داخل الدولة مع مراعاة الحفاظ على هذه الأشتال من الإصابات ومراعاة رشها دورياً ضد حشرة المن الناقلة للفيروس.
خطوات العمل
تعتمد تقنية إنتاج أشتال حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية على ثلاث مراحل أساسية وهي:
المرحلة الأولى
إنبات الأصل:
استخدمت بذور النارنج وتم زراعتها بعد تقشيرها وتعقيمها بمحلول هيدروكسيد الصوديوم في وسط غذائي صلب (بيئة مغذية) تحتوي على الأملاح المعدنية والفيتامينات بالإضافة إلى الهرمونات التي تساعد على سرعة الإنبات والاستطالة. تم تحضين الأنابيب المحتوية على الوسط الغذائي وبذور النارنج بحاضنة ذات درجات حرارة ورطوبة منتظمة وبدون إضاءة لمدة (15-20) يوم حتى تم الحصول على نباتات مستقيمة طولها حوالي 10 سم (أصل).
المرحلة الثانية
التطعيم القمي الدقيق Micrograftiong: تم الحصول على براعم قمية لأصناف مختلفة من الحمضيات من أمهات خالية من الأمــراض الفيروسية وخاصة التراستيزا بعد فحصها سيرولوجياً بطريقة الأليزا وأجريت عمليات التعقيم للتأكد من خلوها من الملوثات الخارجية وفي كابينة العزل (Laminar flow) تم استئصال المرسيتم القمي مجهرياً (الطعم) وأجريت عملية تطعيم بين الأصل بعد إزالة ثلثي الجذر وثلث الساق وبين الطعم وذلك على شكل حرف T. وبعد تثبيت المرسيتم القمي (الطعم) داخل الأصل بشكل حرف T مقلوبة تم زراعة النموذج في أنابيب اختبار تحتوي على أوساط مغذية خاصة وأجري تحضين للأنابيب داخل غرفة النمو على درجة حرارة 28 - 32 ْم مع توفر إضاءة لمدة 16 ساعة ضوئية يومياً وذلك لمدة 30 يوم تقريباً لحين التئام الأصل والطعم والحصول على نبات داخل الأنبوب.
المرحلة الثالثة
التطعيم القمي: Shoot Tip Grafting: أجريت هذه الخطوة داخل البيوت المحمية المنزرعة بأشتال لعدة أصناف من الحمضيات والتي تم استخدامها كأصول للتطعيم. نقلت النباتات النامية في الأنابيب والمتحصل عليها من الخطوة السابقة وتم فصل البراعم النامية وأجريت عملية تطعيم لهذه البراعم على الأصول المختلفة لشتلات الحمضيات مع مراعاة تطابق الأصل مع الطعم لتلافي ظاهرة عدم التطابق. أجريت عملية التطعيم في مناطق مختلفة على الأصل وذلك لضمان نجاح العملية وتم تكييس الشتلات المطعومة بأكياس من البلاستيك بهدف رفع درجة الرطوبة ومنع جفاف منطقة التطعيم وبعد التأكد من نجاح عملية التطعيم تم إزالة الكيس البلاستيكي للسماح للنباتات الناتجة باستمرارية النمو حتى حجم معين وتم نقلها للحقول المستديمة مع مراعاتها من حيث التسميد والري ومنع الإصابة الفيروسية الجديدة. وبذلك تم الحصول على شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية مع مراعاة توافق الأصل والطعم.
التوصـــــــات
نظراً لزيادة الرقعة الزراعية وزراعة العديد من أصناف الحمضيات المحلية والمستوردة ولزيادة انتشار الأمراض الفيروسية التي تفتك بأشجار الحمضيات فتعتبر تقنيات إنتاج شتلات حمضيات خالية من الأمراض الفيروسية من التقنيات الحديثة والسريعة والتي تؤدي إلى إنتاج أعداد هائلة من الشتلات التي يراعى فيها الإنتاجية المرتفعة والتأقلم تحت الظروف المناخية للدولة وكذلك يراعى فيها التوافق بين الأصل والطعم فلذلك نوصي بإتباع طريقة زراعة الأنسجةTissue Culture على نطاق واسع لإنتاج شتلات خالية من الأمراض الفيروسية مع مراعاة عدم تجدد الإصابة لهذه الشتلات وذلك بالحفاظ عليها بعيداً عن مصادر العدوى.